細胞表面分子流式檢測步驟說明注意事項
1． 在使用抗體之前，快速甩動一下，使之聚集到管的底部；
2． 熒光標記的抗體應該避光保存在4℃，不要冷凍；
3． 當染色的時候，固定或延遲分析可能降低某些抗體的熒光信號。為了得到更好的結(jié)果，染色后應該馬上分析。
過程概述：
1． 制作外周血、淋巴組織或者培養(yǎng)細胞的單細胞懸液；
2． 細胞染色抗體（包括直接標記抗體和間接標記抗體）；
3． 洗滌步驟棄掉所有的為束縛的試劑
4． 運行分析流式儀。
注意：流式細胞染色實驗中，所有實驗條件的優(yōu)化都很重要。關(guān)鍵參數(shù)包括靶細胞、抗體效價以及動力學。
試驗A：小鼠淋巴細胞懸液的免疫熒光染色
材料：12×75 mm的圓底試管（Falcon Cat.No.2008）或96孔圓底微量滴定板（Falcon Cat.No.3910），原始抗體（既未純化也未偶聯(lián)），
緩沖液： eBioscience流式染色緩沖液（Cat.No.00-4222），流式鞘液
儀器：移液管和移液器，離心機，冰柜或冰箱，流式儀
試驗時間
半個小時細胞準備，半個小時抗體稀釋和樣品準備，半個小時到一個小時孵育過程，半個小時以上的運行和分析時間
方法細胞準備：
1． 采集組織（脾，淋巴結(jié)，胸腺），用注射器的活塞擠壓以制成單細胞懸液，此過程用10ml的染色緩沖液；
2． 轉(zhuǎn)移到50ml的圓錐形試管中并使大塊沉淀到試管底部或者通過尼龍濾網(wǎng)過濾，得到單細胞懸液；
3． 4℃ 離心沉淀細胞懸液4-5分鐘（300-400g），棄掉上清；
4． 如果上過程采集的脾，還用用RBC裂解，否則進入下一步；
5． 用50ml染色液重懸樣本，進行細胞計數(shù)和活力分析；
6． 再次離心細胞，棄掉上清，重懸細胞使其細胞數(shù)達到2×107 個/ml；
