黃熱病毒（YFV）試劑盒（熒光-PCR法）為上海滬崢PCR主要產(chǎn)品之一，產(chǎn)品優(yōu)勢(shì) 樣品種類多，質(zhì)控嚴(yán)格，高特異性，供貨快，已被國(guó)內(nèi)外廣大科研工作者使用，被稱謂：質(zhì)量信得過產(chǎn)品
通用名稱：黃熱病毒（YFV）試劑盒（熒光-PCR法）

規(guī)格：50T/盒

英文名稱：zika Detection Kit (Real-Time PCR Method)

自備試劑：樣品 RNA

【檢驗(yàn)原理】

本試劑盒對(duì)黃熱病毒（YFV）基因保守區(qū)設(shè)計(jì)特異性的引物和探針[1-3]，用熒光 PCR 技術(shù)對(duì)核酸進(jìn)行體外擴(kuò)增檢測(cè)，從而達(dá)到快速檢測(cè)之目的。

-20℃±5℃，避光保存、運(yùn)輸、反復(fù)凍融不超過 5 次。有效期 12 個(gè)月。

【適用儀器】

ABI 、安捷倫 MX3000P/3005P、MJ Opticon2、LightCycler480、Bio-Rad、eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測(cè)儀。

【標(biāo)本采集】取動(dòng)物組織及其制品、食品或飼料約 1g。

【保存和運(yùn)輸】上述標(biāo)本短期內(nèi)可保存于-20℃，長(zhǎng)期保存可置-70℃。但不能超過 6 個(gè)月，標(biāo)本運(yùn)送應(yīng)采用 0℃冰代。【使用方法】樣品處理（樣本處理區(qū)）

1.1 樣本前處理：

取動(dòng)物組織及其制品、食品或飼料約 1g，手術(shù)剪剪碎混勻后取 0.5g 于研磨器中研磨，加入 1.5mL 生理鹽水后繼續(xù)研磨，待勻漿后轉(zhuǎn)至 1.5mL 滅菌離心管中， 8000rpm 離心 2min，取上清液 100μL 于 1.5mL 滅菌離心管中。

2 DNA 提取

樣本 DNA 的提取采用 DNA 提取試劑盒（離心柱提取法），請(qǐng)嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。

試劑配制（試劑準(zhǔn)備區(qū)）

根據(jù)待檢測(cè)樣本總數(shù)，設(shè)所需要的 PCR 反應(yīng)管管數(shù)為 N(N=樣本數(shù)+1 管陰性對(duì)照+1 管陽(yáng)性對(duì)照；樣品每滿 10 份，多配制 1 份)，每測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表：

將步驟 1 提取的 DNA、陽(yáng)性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取 4μL，加入相應(yīng)的反應(yīng)管中，蓋好管蓋，混勻，短暫離心。

PCR 擴(kuò)增（核酸擴(kuò)增區(qū)）

4.1 將待檢測(cè)反應(yīng)管置于熒光定量 PCR 儀反應(yīng)槽內(nèi)；

4.2 設(shè)置好通道、樣品信息，反應(yīng)體系設(shè)置為 25ul；熒光通道選擇： 檢測(cè)通道

（Reporter Dye）FAM， 淬滅通道（Quencher Dye）NONE，請(qǐng)勿選擇 ROX 參比熒光。

4.3 推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置：

實(shí)時(shí)熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來(lái)指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來(lái)指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對(duì)DNA、RNA樣品進(jìn)行定量（包括*定量和相對(duì)定量）和定性分析。

主要服務(wù)：DNA或RNA的*定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。

主要技術(shù)：引物設(shè)計(jì)、RNA提取、cDNA合成、qPCR。

黃熱病毒（YFV）試劑盒（熒光-PCR法）【注意事項(xiàng)】

1. 每次使用，開蓋之前請(qǐng)先瞬時(shí)離心，使試劑沉于管底。
2. 所有試劑在要求溫度下保存，盡量減少反復(fù)凍融，使用后的試劑應(yīng)立即放回。
3. 本試劑盒為10頭份量試劑，加樣和反應(yīng)程序嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行，由于操作失誤、移液器不 、定時(shí)不準(zhǔn)確造成無(wú)結(jié)果情況，不予負(fù)責(zé)。
4. 吸頭、離心管和PCR管在使用前，應(yīng)高壓滅菌。
5. 注意防止試劑污染，在有效期限內(nèi)用完。